关键区别 - SDS页面VS Western blot
蛋白质印迹是一种检测特定的技术蛋白质来自蛋白质样品。该技术是通过多个关键步骤执行的:凝胶电泳,斑点,然后杂交。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS页面)是一种凝胶电泳技术,用于根据其大小(分子量)分离蛋白质。Western印迹是一张特殊的印迹膜,用于在SDS页面中传递相同的蛋白质模式。SDS页面和Western blot之间的关键区别在于SDS页面允许在混合物中分离蛋白质尽管蛋白质印迹可以从混合物中检测和定量特定蛋白质。两者在蛋白质分析研究中都有用。
内容
1。概述和关键差异
2。什么是SDS页面
3。什么是蛋白质印迹
4。并排比较 - SDS页面vs Western blot
5。概括
什么是SDS页面?
SDS页面是一种用于蛋白质分离的凝胶电泳技术。它通常用于生物化学,遗传学,取证和分子生物学。一旦从样品中提取蛋白质,它们就会在由SDS组成的凝胶上运行聚丙烯酰胺。SDS是一种阴离子洗涤剂,用于使蛋白质(蛋白质)线性化,并将负电荷赋予与其成比例的线性化蛋白分子质量。聚丙烯酰胺成为对凝胶的坚实支持。带负电荷的变性蛋白通过凝胶向仪器的正端迁移。根据蛋白质的尺寸,蛋白质的迁移速度不同,分离发生。因此,SDS页面对于基于其大小的单个蛋白质分离很有用。
在SDS页面中,聚丙烯酰胺凝胶的制备是蛋白质分馏的过程。聚丙烯酰胺的正确浓度和使用的交联剂的类型强烈影响凝胶的物理特性,从而使不同蛋白质的实际分离。凝胶的孔径应适当地进行有效分离。但是,SDS页面被认为是高分辨率蛋白分离技术。
SDS PAGE技术在蛋白质分析中具有重大限制。由于SDS在分离前会贬低蛋白质,因此不允许检测酶活性,蛋白结合相互作用,蛋白质辅因子等。
图01:SDS页面
什么是蛋白质印迹?
蛋白质印迹技术可以从蛋白质混合物中检测特定蛋白质,并测量蛋白质的数量和分子量。蛋白质印迹是在印迹过程中使用的膜,以获取SDS-聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质图案的镜像。用于蛋白质印迹的膜主要由硝酸纤维素或聚偏二氟乙烯(PVDF)组成。带有转移蛋白的膜可用于鉴定所需的蛋白质。它需要高质量的抗体,以通过杂交检测所需的蛋白质。抗体与其特异性结合抗原并揭示了所需的抗原的存在,这是一种蛋白质。
通过电印迹将蛋白质从SDS聚丙烯酰胺凝胶转移到蛋白质印迹。这是一种有效而快速的方法,可导致蛋白质从凝胶中取出电泳并传递到硝酸纤维素膜(Western blot)。
图02:蛋白质印迹
SDS页面和Western印迹有什么区别?
SDS页面vs Western blot |
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| SDS页面是一种凝胶电泳技术。 | 蛋白质印迹是一种在膜上进行的技术,可从混合物中检测特定的蛋白质。 |
| 利用 | |
| SDS页面允许根据蛋白质的大小分离。 | 蛋白质印迹允许在SDS页面凝胶上转移蛋白质,而不会改变其模式并允许与特定抗体混合杂交。 |
| 缺点 | |
| 蛋白质变性,高成本和神经毒素化学物质的存在是该技术的缺点。 | 这项技术是耗时的,需要经验丰富的个人和特定控制条件。 |
摘要 - SDS页面VS Western印迹
SDS页面和Western印迹是蛋白质分析涉及的两种方法。SDS页面可以根据其分子量轻松将蛋白质分离在凝胶上。Western印迹有助于通过与特定抗体杂交确认特定蛋白质的存在和数量。这是SDS页面和Western印迹之间的区别。
参考:
1. Blancher,C。和A. Jones。“ SDS -Page和Western印迹技术。”分子医学的方法。美国国家医学图书馆网络。2017年3月27日
2. Nowakowski,Andrew B.,William J. Wobig和David H. Petering。“天然SDS-PAGE:蛋白质的高分辨率电泳分离,保留了包括结合金属离子在内的天然特性。”金属学:综合生物特征科学。美国国家医学图书馆,2014年5月。2017年3月27日。
图片提供:
1. Bensaccount在英语Wikipedia上的“ SDS-PAGE电泳”(CC由3.0)通过下议院维基梅迪亚
2. Amanthabagdon的“ Western blot 114a” - 通过下议院维基梅迪亚


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